原代细胞分离与培养

 

   原代细胞是来源于不同组织器官，胚胎及血液的新鲜样本经特殊实验方法处理而制备的原初培养细胞，这一过程被称为原代细胞分离。原代细胞具有保持原有细胞的基本性质，如果是正常细胞，仍然保留二倍体数。

细胞的分离纯化和细胞培养技术是细胞生物学实验的基础。我们通常把第一代至第十代以内的培养细胞统称为原代细胞。原代细胞培养是指将组织从动物体内取出，经各种酶(常用胰蛋白酶)、螯合剂(常用EDTA) 或机械方法剪碎处理，分散成单细胞，在合适的培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖的过程。

实验流程

原代细胞分离和培养基本步骤

1、器官和组织的选择

尽可能的去除不必要的组织和血迹。

2、原代细胞的分离

（1）应用原代细胞分离试剂盒。

3、原代细胞的培养：

（1）原代细胞特制培养基

（2）原代细胞特制添加物

（3）优质胎牛血清

4、细胞的培养和鉴定：

原代细胞鉴定试剂盒

4、原代细胞的传代、保存

（1）传代：依椐细胞的生长状态，生长的细胞1：2或1：3进行传代。

（2）保存：DMSO＋培养液＋血清

按下列顺序降温：室温→4℃（20分钟）→冰箱冷冻室（30分钟）→超低温冰箱（－80℃ 过夜）→液氮。

5、原代细胞的复苏

（1）取出细胞，迅速放入37℃温水中快速解冻。

（2）吸出细胞悬液，并加10倍以上培养液。

（3）用培养液适当稀释后接种培养瓶，放入37℃ CO2 培养箱静置培养。

项目周期

根据具体细胞的性质不同培养周期长短略有差异，常规参考周期为2~3周左右

交付内容

1．符合要求的原代细胞系；

2．鉴定报告；

 

 

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