| 产品名称 | A549 人非小细胞肺癌细胞 |
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| 商品货号 | BRCC-0402-NY |
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| 中文名称 | 人肺癌紫杉醇耐药株 |
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| 组织来源 | 国家资源库 |
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| 形态特征 | 该细胞系是1972年由GiardDJ通过肺癌组织移植培养建系的，源自一位58岁的白人男性身上切除的肺肿瘤移植而来；细胞在文献中被描述为在 athmyic 小鼠中诱导肿瘤并合成卵磷脂。A549能通过胞苷二磷脂酰胆碱途径合成富含不饱和脂肪酸的卵磷脂；角蛋白阳性。该细胞复苏后不耐低温和长时间运输，复苏后沿途最低温度需高于10摄氏度且运输路途不可过长。冬天常温邮寄A549细胞时会有细胞脱落、坏死等现象，请尽量选用干冰冷链快递。这是一种亚三倍体人类细胞系，模态染色体数为 66，存在于 24% 的细胞中。具有 64 (22%)、65 和 67 条染色体计数的细胞也以相对较高的频率出现；具有较高倍性的比率低至 0.4%。在所有细胞中都有 6 个标记以单拷贝形式存在。它们包括 der(6)t(1;6) (q11;q27); ?del(6) (p23); del(11) (q21)、del(2) (q11)、M4 和 M5。大多数细胞有两条 X 和两条 Y 染色体。然而，在分析的 50 个细胞中有 40% 丢失了一条或两条 Y 染色体。N2 和 N6 染色体每个细胞有一个拷贝；N12和N17通常有4个副本
https://www.atcc.org/products/crm-ccl-185
https://www.dsmz.de/collection/catalogue/details/culture/ACC-107 |
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| 特征特性 | 形态：上皮细胞样，多角形；贴壁生长。用途：仅供科研使用。 |
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| 细胞污染 | |
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| 培养条件 | 1） 准备F-12K（推荐BasMed-AW-007）培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%。 2） 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。 |
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| 传代方法 | |
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| 细胞冻存步骤 | 待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例； 1．细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入2ml完全培养基终止消化，可使用血球计数板计数。 2．1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮，加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每1ml的数量分配到冻存管中，注意冻存管做好标识。博瑞生物按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。3．将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 |
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| 复苏细胞步骤 | 将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。 |
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| 细胞传代步骤 | 如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。 |
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| 冻存条件 | 常温发货：收到后T25瓶消毒再放置培养箱静置2-3小时后观察密度和状态拍照2-3张反馈给销售，密度达标就可以传代。前期传代比例1:2，等再次长满后传代时建议冻存其中一整瓶成1个1ml冻存管，另外一瓶继续传代，反复冻存2-3只后才扩增做实验，以防突发情况引起断种。
干冰发货：常规细胞发货冻存管2只，复苏1只，另外一只备用，**个复苏不成功时严格按照厂家要求复苏第二个，均没有复苏成功的情况即时留存复苏照片通知销售。 |
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