| 产品名称 | SU-DHL-6 人弥漫性大B细胞淋巴瘤细胞 |
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| 商品货号 | BRCC-001-0061 |
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| 中文名称 | 人弥漫性大B细胞淋巴瘤细胞 |
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| 组织来源 | 国家资源库 |
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| 形态特征 | 形态：圆形淋巴细胞单独或成团悬浮生长。用途：仅供科研使用。 |
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| 特征特性 | 从一名患有B 细胞非霍奇金淋巴瘤 (B-NHL) 的 43 岁白人男性的腹腔积液中建立，当时被描述为弥漫性、混合的小细胞和大细胞类型；细胞系携带EZH2 Y641N 突变；分配给 GCB 样淋巴瘤亚型（生发中心 B 细胞）。EB病毒阴性，具有t(14；18)易位。基因表达：单克隆细胞质免疫球蛋白：IgM，λ轻链。所有DHL 细胞系均对 Epstein-Barr 病毒 (EBV) 基因组的存在呈阴性。并在其可能是染色体间断点的重链基因位点内表现出意想不到的重组。t(14;18) 易位将截短的 bcl-2 基 |
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| 细胞污染 | |
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| 培养条件 | 1640+10%FBS+1%L-谷氨酰胺+1%丙酮酸钠+1%P/S悬浮生长 |
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| 传代方法 | 1） 准备1640 (推荐：BasMed-AW-002)培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%。 2）培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。 |
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| 细胞冻存步骤 | 待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例； 1．细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入2ml完全培养基终止消化，可使用血球计数板计数。 2．1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮，加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每1ml的数量分配到冻存管中，注意冻存管做好标识。博瑞生物按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。3．将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 |
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| 复苏细胞步骤 | 将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。 |
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| 细胞传代步骤 | 如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。 |
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| 冻存条件 | 贴壁细胞参考：
一.消毒静置等细胞稳定后拍照100X和200X。弃去培养上清，用PBS润洗细胞1-2次并吸走。
二. T25瓶加入0.25％EDTA胰蛋白酶1-2ml于培养瓶中震荡混匀，如果属于贴壁不牢固的细胞很容易脱落的就培养箱外面消化震荡待脱落90%以上终止消化，一般小于1分钟以内，甚至不加胰酶有部分贴壁非常不牢固的细胞也会自然震荡脱落。如果是贴壁牢固的细胞则置于37℃培养箱中消化提高效率，每40-50秒拿出培养箱震荡帮助细胞脱落，如脱落90%以上则对应3-6ml含有10%血清的完全培养基终止彻底，以防胰酶残留损伤细胞。如果贴壁非常牢固的细胞，脱落的比例比较低，也不超过2分钟后终止消化彻底，再加入1ml完全培养基让细胞缓冲后再过2分钟进行二次消化，反复分步消化以降低单次消化时长，减少刺激，保护细胞膜。或采用刮产刮细胞的方式处理也可以。总归原则是达到消化目的的同时减少细胞膜受到的损伤越小越好。
三.消化完成后轻轻吹匀后吸出，在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶/6cm培养皿中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2和以上比例进行，具体以实际细胞密度决定。期间多的细胞一定保存多份细胞冻存管备种。
悬浮细胞参考：
大多数悬浮细胞对于环境比较敏感，建议一直维持高密度生长，一般情况下细胞密度维持在1×10 5到1×10 6个/mL（不同细胞对密度要求不同）。如需分瓶可以将细胞悬液收集到离心管中800-1000rpm，离心5min，弃去上清，补加1-2mL培养液后重悬混匀后将细胞悬液按1：2的比例（首次可以1:1分瓶）分到新T25瓶中，添加5-6ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2和以上比例进行。大多数血液类相关的悬浮细胞受运输影响比较大，会出现一批死细胞，如果因此密度降低了，可以离心后转移至T25瓶中竖着培养，培养基添加5ml 以提高总体密度，隔一天后观察密度可以的话再补液3ml完全培养基后T25瓶放倒，等沉淀稳定后观察细胞密度，持续添加培养基等密度上升足够传代为止。 |
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