| 产品名称 | RWPE-1 人前列腺正常细胞 |
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| 商品货号 | BRCC-003-0013 |
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| 中文名称 | 人正常前列腺上皮细胞 |
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| 组织来源 | 国家资源库 |
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| 形态特征 | 形态：上皮细胞样，贴壁生长。用途：仅供科研使用。 |
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| 特征特性 | 1996年由WebberMM（密歇根州立大学，国家癌症研究所）从54岁白人男性正常成人前列腺周边组织的上皮细胞经过转染HPV-18后建系得到该细胞株。在三维基质胶培养时，在雄激素作用下，RWPE-1细胞形成腺胞并向培养基中分泌PSA（kallikrein 3, KLK3）。来源于RWPE-1的细胞再用Kirstin鼠类肿瘤病毒转染Ki-ras基因，建立了能成瘤的RWPE-2细胞株和 RWPE2-W99细胞株。同时，用N-甲醇-N-硝基脲处理RWPE-1，建立了一系列模拟前列腺癌进程中不同时期的成瘤细胞株， |
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| 细胞污染 | |
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| 培养条件 | 1）准备 角质细胞无血清培养基 (推荐：awcell-0019培养基，包含两个组份：基础培养基1瓶+生长因子1管）或者 Defined K-SFM (part of kit NO:,10744-019) ，添加对应因子，1% P/S 来培养细胞。 备注:Defined K-SFM (part of kit NO:,10744-019)培养液包含两个组份：基础培养基1瓶（货号10785-012）+生长因子1管( 货号10784-015）。 2） 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：3 |
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| 传代方法 | |
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| 细胞冻存步骤 | 待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例； 1．细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入2ml完全培养基终止消化，可使用血球计数板计数。 2．1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮，加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每1ml的数量分配到冻存管中，注意冻存管做好标识。明舟生物按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。3．将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 |
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| 复苏细胞步骤 | 将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。 |
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| 细胞传代步骤 | 如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。 |
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| 冻存条件 | 常温发货：收到后T25瓶消毒再放置培养箱静置2-3小时后观察密度和状态拍照2-3张反馈给销售，密度达标就可以传代。前期传代比例1:2，等再次长满后传代时建议冻存其中一整瓶成1个1ml冻存管，另外一瓶继续传代，反复冻存2-3只后才扩增做实验，以防突发情况引起断种。
干冰发货：常规细胞发货冻存管2只，复苏1只，另外一只备用，**个复苏不成功时严格按照厂家要求复苏第二个，均没有复苏成功的情况即时留存复苏照片通知销售。处理方法操作。 |
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