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    THLE-2 人正常肝细胞
    THLE-2 人正常肝细胞
    价格:¥0
    货期:1周
    编号:BRCC-004-0030
    品牌:BRCC®

    活化细胞
    冻存细胞
    荧光标记细胞

    规格:
    T25瓶
    冻存管

      产品名称THLE-2 人正常肝细胞
      商品货号BRCC-004-0030
      中文名称人肝永生化细胞
      组织来源国家资源库
      形态特征形态:上皮细胞样,贴壁生长。用途:仅供科研使用
      特征特性THLE-2是从供体的左叶分离出来的上皮细胞。该细胞系由国家癌症研究所提供。通过感染SV40大T抗原来源于原代正常肝细胞。[RF84749]该病毒是通过将含有SV40 T抗原的Bgl I-Hpa I片段的逆转录病毒载体引入两向异性包装细胞系PA317中产生的。THLE-2和THLE-3细胞表达正常成人肝上皮细胞的表型特征。当注射到无胸腺裸鼠中时,它们是非致瘤性的,具有近二倍体核型,并且不表达甲胎蛋白。[RF84750]THLE-2 和 THLE-3 细胞将苯并 [a]芘、N-亚硝基二甲胺和黄曲霉毒素 B1
      细胞污染
      培养条件准备BEGM kit培养基套装 (Lonza/Clonetics,CC-3170);或本公司开发的国产培养基均可。 2)注意:不要过滤完整的培养基。 3) 培养条件:气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。
      传代方法准备BEGMkit培养基(Lonza-Clonetics,CC-3170)备注:培养基包含(A+B),ATCC不使用BEGM试剂盒提供的GA(庆大霉素-两性霉素B混合物)和肾上腺素(Epinephrine),另向其中添加额外的5ng-mLEGF、70ng-mL磷酸乙醇胺和10%FBS。可根据实验要求添加P/S双抗,1%。A:BEBM基础培养基(货号CC-3171)500MLB:细胞生长添加
      细胞冻存步骤待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面T25瓶为例; 1.细胞冻存时,弃去培养基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶,细胞变圆脱落后,加入2ml完全培养基终止消化,可使用血球计数板计数。 2.1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮,加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀,按每1ml的数量分配到冻存管中,注意冻存管做好标识。明舟生物按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。3.将冻存管置于程序降温盒中,放入-80度冰箱,至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 
      复苏细胞步骤将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10cm皿中,加入约8ml培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度
      细胞传代步骤如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。3. 按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。4. 将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
      冻存条件常温发货:收到后T25瓶消毒再放置培养箱静置2-3小时后观察密度和状态拍照2-3张反馈给销售,密度达标就可以传代。前期传代比例1:2,等再次长满后传代时建议冻存其中一整瓶成1个1ml冻存管,另外一瓶继续传代,反复冻存2-3只后才扩增做实验,以防突发情况引起断种。

      干冰发货:常规细胞发货冻存管2只,复苏1只,另外一只备用,**个复苏不成功时严格按照厂家要求复苏第二个,均没有复苏成功的情况即时留存复苏照片通知销售。
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