北京博瑞康沐生物技术有限公司

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产品名称	293T-H-RspoI-Fc（Cultrex R-spondin1 (Rspo1) Cells）
商品货号	BRCC-001-0211
中文名称	稳定表达RspoI蛋白的293T细胞
组织来源	国家资源库
形态特征	形态：上皮细胞样，贴壁生长，贴壁能力较弱. 用途：仅供科研使用。
特征特性	293细胞株插入SV40 T-抗原的温度敏感基因后产生的高转染效率的衍生株称为293T。是293T（293tsA1609neo）细胞系（ATCC CRL-11268）的衍生物。细胞持续表达SV40抗原，该细胞常用于转染实验，转染效率较高。（转染一般以50%密度铺板，待细胞刚刚贴到皿壁上后（一般8-10小时），即可进行转染操作）细胞具有 Geniticin（新霉素，G418）抗性，并且在 33°C 下表达 SV-40 large T，但在 40°C 下不表达； https://www.atcc.org
细胞污染
培养条件	DMEM+10%FBS+1%L-谷氨酰胺+1%NEAA+1%P/S贴壁
传代方法	1）准备DMEM（推荐BasMed-AW-001）培养基；优质胎牛血清，10%；L-谷氨酰胺（2mM）1%；NEAA 1% 基础培养基DMEM 本身含有谷氨酰胺和NEAA的可以不用添加；双抗 1% 2）培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
细胞冻存步骤	待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例； 1．细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入2ml完全培养基终止消化，可使用血球计数板计数。 2．1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮，加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每1ml的数量分配到冻存管中，注意冻存管做好标识。博瑞生物按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。3．将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
复苏细胞步骤	将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
细胞传代步骤	如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
冻存条件	常温发货：收到后T25瓶消毒再放置培养箱静置2-3小时后观察密度和状态拍照2-3张反馈给销售，密度达标就可以传代。前期传代比例1:2，等再次长满后传代时建议冻存其中一整瓶成1个1ml冻存管，另外一瓶继续传代，反复冻存2-3只后才扩增做实验，以防突发情况引起断种。干冰发货：常规细胞发货冻存管2只，复苏1只，另外一只备用，**个复苏不成功时严格按照厂家要求复苏第二个，均没有复苏成功的情况即时留存复苏照片通知销售。

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