| 产品名称 | NCI-H660 人神经内分泌前列腺癌细胞 |
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| 商品货号 | BRCC-001-0233 |
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| 中文名称 | 人神经内分泌前列腺癌细胞 |
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| 组织来源 | 国家资源库 |
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| 形态特征 | 形态：上皮细胞样,混合生长（同时存在贴壁细胞和悬浮细胞生长）,用途：仅供科研使用 |
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| 特征特性 | AF Gazdar及其同事于1983年从是一种上皮神经内分泌细胞，是从一名63岁的白人男性癌症患者的前列腺中分离出来的。虽然NCI-H660具有小细胞癌的外观和许多特性，但也存在差异。NCI-H660表达L-多巴羧化酶和蟾蜈样免疫反应性水平升高。细胞表达功能性心房利钠肽（ANP）受体，但ANP添加不会对细胞的生长模式产生可检测到的变化。 www.atcc.org/products/crl-5813 |
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| 细胞污染 | |
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| 培养条件 | 1640+5%FBS+1%ITS（10ug-mL胰岛素；转铁蛋白5.5ug-mL;5ng-mL硒）+10nm氢化可的松+1%P/S半贴壁 |
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| 传代方法 | 1） 准备1640 (推荐：BasMed-AW-002)培养基；10nMβ-雌二醇>；10nM氢化可的松>；1*TS（胰岛素转铁蛋白硒）；FBS 5% ；双抗，1%。 2）培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。 |
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| 细胞冻存步骤 | 冻存步骤：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例； 1．细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入2ml完全培养基终止消化，可使用血球计数板计数。 2．1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮，加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每1ml的数量分配到冻存管中，注意冻存管做好标识。博瑞生物按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。3．将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 |
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| 复苏细胞步骤 | 该细胞培养难度很大，贴壁和悬浮同时存在，并且特别容易聚集成团生长，如果聚集成团严重会导致细胞外层吸收营养通畅，内测营养和气体交换异常，从而导致细胞凋亡，因为培养过程中无法避免细胞会本身聚集生长，但是又要控制聚集的程度。可以采用吹散开或者震荡等方式分散开聚集严重的细胞团块才是培养该细胞的关键。
贴壁细胞参考：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。
3.轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶/6cm培养皿中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。
3）细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。
4）运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。
悬浮细胞参考：
悬浮状态下生长的细胞，可以通过向培养瓶中添加完全培养基来维持细胞的生长状态，一般情况下细胞密度维持在1×105~1×106个/mL（不同细胞对密度要求不同，）可以维持细胞的正常生长。如需分瓶可以将细胞悬液收集到离心管中1000rpm，离心5min，弃去上清，补加1-2mL培养液后重悬混匀后将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:4的比例进行。 |
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| 细胞传代步骤 | 如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。 |
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| 冻存条件 | 常温发货：收到后T25瓶消毒再放置培养箱静置2-3小时后观察密度和状态拍照2-3张反馈给销售，密度达标就可以传代。前期传代比例1:2，等再次长满后传代时建议冻存其中一整瓶成1个1ml冻存管，另外一瓶继续传代，反复冻存2-3只后才扩增做实验，以防突发情况引起断种。
干冰发货：常规细胞发货冻存管2只，复苏1只，另外一只备用，**个复苏不成功时严格按照厂家要求复苏第二个，均没有复苏成功的情况即时留存复苏照片通知销售 |
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