| 产品名称 | HBEC-5i 人大脑内皮细胞 |
|---|
| 商品货号 | BRCC-001-0238 |
|---|
| 中文名称 | 人大脑内皮细胞 |
|---|
| 组织来源 | 国家资源库 |
|---|
| 形态特征 | 形态：内皮样细胞，贴壁生长。 用途：仅供科研使用。 |
|---|
| 特征特性 | Kathryn Kellar博士于1994年建立。从死于各种原因的患者身上获得的人类男性患者大脑皮层的小片段。大脑没有任何病理异常。进行分离和纯化程序并培养细胞。然后用含有SV40大T抗原的质粒转染它们。表达血管性血友病因子（vWF），VE-钙粘蛋白，闭塞素和细胞粘附分子VCAM-1和ICAM-1。除了 CD54、CD40 和 CSA 外，在 TNF 激活时显示 CD54 和 CD106 的上调。HBEC-5i细胞表现出脑内皮细胞的主要特征，特别是高效的紧密连接结构，通过高跨内皮电阻和对70-kDa葡聚糖 |
|---|
| 细胞污染 | |
|---|
| 培养条件 | 1）准备内皮细胞培养体系（推荐：PriMed-AW-002）包含： 内皮细胞培养基础培养基 93% 优质胎牛血清（FBS） 5% 内皮细胞培养添加剂 1% 青霉素/链霉素，P/S 1% 2）培养条件： 空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。 |
|---|
| 传代方法 | |
|---|
| 细胞冻存步骤 | 待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例； 1．细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入2ml完全培养基终止消化，可使用血球计数板计数。 2．1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮，加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每1ml的数量分配到冻存管中，注意冻存管做好标识。明舟生物按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。3．将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 |
|---|
| 复苏细胞步骤 | 将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。 |
|---|
| 细胞传代步骤 | 如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。 |
|---|
| 冻存条件 | 常温发货：收到后T25瓶消毒再放置培养箱静置2-3小时后观察密度和状态拍照2-3张反馈给销售，密度达标就可以传代。前期传代比例1:2，等再次长满后传代时建议冻存其中一整瓶成1个1ml冻存管，另外一瓶继续传代，反复冻存2-3只后才扩增做实验，以防突发情况引起断种。
干冰发货：常规细胞发货冻存管2只，复苏1只，另外一只备用，**个复苏不成功时严格按照厂家要求复苏第二个，均没有复苏成功的情况即时留存复苏照片通知销售。 |
|---|
