| 产品名称 | HBE135-E6E7 人支气管上皮细胞 |
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| 商品货号 | BRCC-001-0240 |
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| 中文名称 | 人支气管上皮样细胞 |
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| 组织来源 | 国家资源库 |
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| 形态特征 |
形态：上皮细胞样贴壁生长。 用途：仅供科研使用。用途：仅供科研使用。 |
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| 特征特性 | M Tsao教授1994年从一名54岁因鳞状细胞癌而接受肺叶切除术的白人男性的正常支气管上皮中建立。来自**次传代的原代外植体的细胞被含有人乳头瘤病毒 (HPV) E6E7 基因的重组逆转录病毒 LXSN16E6E7 感染。在 0.4 mg/mL G418 存在下选择细胞。Northern印迹杂交显示永生化HBE细胞表达高水平的表皮生长因子受体(EGFR)、转化生长因子-α(TGF-α)和双调蛋白(AR)的mRNA，但不表达表皮生长因子(EGF)。 https://www.atcc.org/Produc |
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| 细胞污染 | |
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| 培养条件 | 1） 准备：KM (SCIENCELL CAT NO:2101)，或者gibico K-SFM。 2）培养条件：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。 |
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| 传代方法 | |
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| 细胞冻存步骤 | 待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例； 1．细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入2ml完全培养基终止消化，可使用血球计数板计数。 2．1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮，加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每1ml的数量分配到冻存管中，注意冻存管做好标识。明舟生物按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。3．将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 |
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| 复苏细胞步骤 | 将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。 |
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| 细胞传代步骤 | 如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。 |
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| 冻存条件 | 常温发货：收到后T25瓶消毒再放置培养箱静置2-3小时后观察密度和状态拍照2-3张反馈给销售，密度达标就可以传代。前期传代比例1:2，等再次长满后传代时建议冻存其中一整瓶成1个1ml冻存管，另外一瓶继续传代，反复冻存2-3只后才扩增做实验，以防突发情况引起断种。
干冰发货：常规细胞发货冻存管2只，复苏1只，另外一只备用，**个复苏不成功时严格按照厂家要求复苏第二个，均没有复苏成功的情况即时留存复苏照片通知销售。 |
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