| 产品名称 | NK92 人恶性非霍奇金淋巴瘤患者的自然杀伤细胞 |
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| 商品货号 | BRCC-003-0016 |
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| 中文名称 | 人恶性非霍奇金淋巴瘤患者的自然杀伤细胞 |
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| 组织来源 | 赛比曼 |
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| 形态特征 | 形态：卵母细胞样,悬浮生长。用途：仅供科研使用。 |
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| 特征特性 | NK-92是从一位患有急进性非霍奇金淋巴瘤的50岁白人男性外周血单核细胞衍生来的一株白细胞介素-2依赖型NK细胞株。这株细胞对很多恶性细胞有细胞毒性；铬释放试验显示它能杀死K562和Daudi细胞。NK-92细胞(经过照射以防止增殖)可以有效地用于血液中白血病的体外免疫清扫而不危及血细胞的功能。NK-92细胞有以下特征： CD2, CD7, CD11a, CD28, CD45, CD54表面标记阳性，CD56亮；CD1, CD3, CD4, CD5, CD8, CD10, CD14, CD16, CD19 |
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| 细胞污染 | |
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| 培养条件 | MEMα+0.2mMInositol（肌醇）+0.1mMβ-mercaptoethanol（β巯基乙醇）β+0.02mMFolicAcid（叶酸）+100-200U-mLrecombinantIL-2白介素+12.5%HS(HYCLONE马血清）+12.5%FBS+1%P/S |
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| 传代方法 | 贴壁细胞参考： 一.消毒静置等细胞稳定后拍照100X和200X。弃去培养上清，用PBS润洗细胞1-2次并吸走。 二. T25瓶加入0.25％EDTA胰蛋白酶1-2ml于培养瓶中震荡混匀，如果属于贴壁不牢固的细胞很容易脱落的就培养箱外面消化震荡待脱落90%以上终止消化，一般小于1分钟以内，甚至不加胰酶有部分贴壁非常不牢固的细胞也会自然震荡脱落。如果是贴壁牢固的细胞则置于37℃培养箱中消化提高效率，每40-50秒拿出培养箱震荡帮助细胞脱落，如脱落90%以上则对应3-6ml含有10%血清的完全培养基终止彻底 |
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| 细胞冻存步骤 | 待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例； 1．细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入2ml完全培养基终止消化，可使用血球计数板计数。 2．1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮，加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每1ml的数量分配到冻存管中，注意冻存管做好标识。明舟生物按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。3．将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 |
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| 复苏细胞步骤 | 将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。 |
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| 细胞传代步骤 | 如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。 |
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| 冻存条件 | 待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例； 1．细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入2ml完全培养基终止消化，可使用血球计数板计数。 2．1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮，加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每1ml的数量分配到冻存管中，注意冻存管做好标识。博瑞生物按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。3．将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 |
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