| 产品名称 | TM3 小鼠睾丸间质细胞 |
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| 商品货号 | BRCC-003-0069 |
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| 中文名称 | 小鼠睾丸间质细胞 |
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| 组织来源 | |
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| 形态特征 | 1） 来源：小鼠，睾丸间质(上皮)
2） 形态：上皮细胞样，贴壁生长
3） 含量：>1x106 细胞数
4） 规格：T25瓶或者1mL冻存管包装
5) 用途：仅供科研使用。 |
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| 特征特性 | 源自11-13 天龄 BALB/c nu/+ 小鼠正常睾丸的 Leydig 细胞富集制剂的原代培养物。细胞在LH作用下cAMP产量升高，但对促卵泡激素没有响应。对LH的响应持续时间与血清批次有关。在LH存在下，细胞可以代谢胆固醇。cAMP 产生增加，但对促卵泡激素 (FSH) 没有反应。这些细胞在免疫抑制小鼠中没有致瘤性，但在半固体培养基中确实形成了集落。表达前列腺素F2a。黄体生成素(LH); 表皮生长因子 (EGF); 雄激素受体；雌激素受体；孕激素受体。ectromelia 病毒（鼠痘）呈阴性 h |
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| 细胞污染 | |
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| 培养条件 | DMEM-F12+2.5%FBS+5%马血清+1%P/S贴壁 |
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| 传代方法 | 1） 准备DMEM/F12（推荐BasMed-AW-005）培养基；优质胎牛血清，2.5%；马血清，5%（推荐AWCell-002b）；双抗，1%。 2） 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。 |
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| 细胞冻存步骤 | 待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例； 1．细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入2ml完全培养基终止消化，可使用血球计数板计数。 2．1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮，加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每1ml的数量分配到冻存管中，注意冻存管做好标识。博瑞生物按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。3．将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 |
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| 复苏细胞步骤 | 注：只使用单一血清培养，无法保证细胞状态。
对于贴壁细胞传代可以参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。
3.轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。
3）细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。 |
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| 细胞传代步骤 | 如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。 |
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| 冻存条件 | 低温：（1）1mL冻存管包装干冰运输，收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。
常温: （2） T25瓶复苏的存活细胞常温发货，收到后按照细胞接收后的处理方法操作。 |
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