| 产品名称 | MKN-45 人胃癌细胞 |
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| 商品货号 | BRCC-ZHYC-0503 |
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| 中文名称 | 人胃癌细胞 |
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| 组织来源 | 国家资源库 |
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| 形态特征 | 1） 来源：女性，胃，胃淋巴结
2） 形态：圆形，贴壁和少量悬浮生长
3） 含量：>1x106 细胞数
4） 规格：T25瓶或者1mL冻存管包装
5） 用途：仅供科研使用。 |
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| 特征特性 | 该细胞系由Hojo H建立，源于一位62岁患有胃（髓质型）低分化腺癌日本女性的肝转移灶。ELISA：逆转录酶阴性；PCR：EBV-、HBV-、HCV-、HIV-1-、HIV-2-、HTLV-I/II-、MLV-、SMRV-生产高水平的CEA。 注意：表明PubMed= 1370612和 PubMed= 15900046 中没有 TP53 突变。 https://www.dsmz.de/collection/catalogue/details/culture/ACC-409 https://cellb |
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| 细胞污染 | |
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| 培养条件 | 1640+10%FBS+1%P/S贴壁不牢 |
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| 传代方法 | 1） 准备RPMI-1640（BasMed-AW-002）培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%。 2） 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。 |
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| 细胞冻存步骤 | 待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例； 1．细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入2ml完全培养基终止消化，可使用血球计数板计数。 2．1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮，加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每1ml的数量分配到冻存管中，注意冻存管做好标识。博瑞生物按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。3．将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 |
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| 复苏细胞步骤 | 该细胞为悬浮和轻微的贴壁细胞，传代可以参考以下方法：
1. 收集：将培养瓶中的悬浮的细胞收集到离心管中。用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。由于细胞贴壁不牢PBS润洗后细胞会脱落所以PBS也要回收到离心管中。
2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL）置于37℃培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。
3. 将收集到的悬浮细胞、pbs清洗液中的细胞和消化下来的贴壁细胞以1000rpml离心5min，弃去上清，补加1-2mL培养液后重悬混匀后将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。
3） 细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。 |
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| 细胞传代步骤 | 如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。 |
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| 冻存条件 | 低温：（1）1mL冻存管包装干冰运输，收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。
常温: （2） T25瓶复苏的存活细胞常温发货，收到后按照细胞接收后的处理方法操作。 |
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