| 产品名称 | MDA-MB-436 人乳腺癌细胞 |
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| 商品货号 | BRCC-ZHYC-0030 |
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| 中文名称 | 人乳腺癌细胞 |
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| 组织来源 | 国家资源库 |
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| 形态特征 | 形态：有多核成分的多形细胞，贴壁生长 |
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| 特征特性 | RCailleau从一名43岁患有乳腺腺癌女性的胸腔积液中建立，细胞呈多形性，大多数细胞在间接免疫荧光染色时呈现与抗微管抗体的强烈反应。基因表达：微管蛋白；肌动蛋白。表达高水平seprase。 https://www.atcc.org/products/htb-130 |
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| 细胞污染 | |
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| 培养条件 | L15+10%FBS+0.01mg-ml胰岛素+16ug-ml谷胱甘肽 |
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| 传代方法 | 1)准备L15基础培养基 （BasMed-AW-009） 89% 优质胎牛血清 （awcell-0500） 10% P/S青霉素-链霉素 （awcell-15140-122） 1% 谷胱甘肽（还原型） （awcell-8180） 16ug/ml 胰岛素 （awcell-0016-a) 0.01 |
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| 细胞冻存步骤 | 待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例； 1．细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入2ml完全培养基终止消化，可使用血球计数板计数。 2．1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮，加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每1ml的数量分配到冻存管中，注意冻存管做好标识。博瑞生物按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。3．将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 |
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| 复苏细胞步骤 | 注意事项：
a．该细胞不能用胰酶消化，传代时，使用细胞刮铲轻轻把细胞刮下来。抽出细胞液离心后传到新的培养瓶中。
b．L-15培养基配方设计用于与大气进行自由气体交换。使用该培养基进行培养时应使用空气100%。CO2和空气混合物对细胞有害。如果没有条件准备空气气相100%的培养箱的，可以采用不透气密封盖的T25培养瓶来培养，培养过程中每天将细胞拿出培养箱换1-2次空气。
1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2.加入0.25％（w/ v）胰蛋白酶-0.53mMEDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。
3.轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。
3）细胞冻存:收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。
4）运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。 收到细胞后**次传代建议T25培养瓶1：2传代。 |
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| 细胞传代步骤 | 如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。 |
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| 冻存条件 | 低温：（1）1mL冻存管包装干冰运输，收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。
常温:（2）T25瓶复苏的存活细胞常温发货，收到后按照细胞接收后的处理方法操作。 |
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