| 产品名称 | ZR-75-1 人乳腺导管癌细胞 |
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| 商品货号 | BRCC-400-0021 |
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| 中文名称 | 人乳腺导管癌细胞 |
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| 组织来源 | 国家资源库 STR鉴定已通过 |
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| 形态特征 | 形态：上皮细胞样，贴壁生长.用途：仅供科研使用。 |
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| 特征特性 | 来源于一位63岁白人女性，这种细胞产生高水平的MUC-1 粘液素mRNA，低水平的MUC-2 mRNA，但不表达MUC-3基因。该细胞系具有超三倍体染色体数。模态染色体数为 72，出现在 26% 的细胞中，高倍性率为 1.2%。共有 18 个标记。 它们是：t(1q,?), M2,M3, del(3) (p21), der(5)t(5;?) (q35;?), del(6) (q21) , t(11q14q), t(11;11) (p15;q11), der(14)t(2;14) (q21;q32), t( |
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| 细胞污染 | |
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| 培养条件 | 1640（含NaHCO31.5g-L）+10%FBS+1%PS |
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| 传代方法 | 准备RPMI-1640（含NaHCO3 1.5g/L推荐awcell-128-0002 或者GIBCO,货号31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L,或者ATCC-formulated RPMI-1640 Medium, Catalog No. 30-2001 ATCC 改良）培养基，优质胎牛血清10%；P/S 1%. 2） 培养条件：空气，100%；该细胞培养不能通入CO2， 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。 |
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| 细胞冻存步骤 | 待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例； 1．细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入2ml完全培养基终止消化，可使用血球计数板计数。 2．1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮，加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每1ml的数量分配到冻存管中，注意冻存管做好标识。博瑞生物按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。3．将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 |
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| 复苏细胞步骤 | 贴壁细胞参考：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。
3.轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶/6cm培养皿中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。
3）细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。
4）运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。
悬浮细胞参考：
悬浮状态下生长的细胞，可以通过向培养瓶中添加完全培养基来维持细胞的生长状态，一般情况下细胞密度维持在1×105~1×106个/mL（不同细胞对密度要求不同，）可以维持细胞的正常生长。如需分瓶可以将细胞悬液收集到离心管中1000rpm，离心5min，弃去上清，补加1-2mL培养液后重悬混匀后将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:4的比例进行。 |
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| 细胞传代步骤 | 如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。 |
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| 冻存条件 | 常温发货：收到后T25瓶消毒再放置培养箱静置2-3小时后观察密度和状态拍照2-3张反馈给销售，密度达标就可以传代。前期传代比例1:2，等再次长满后传代时建议冻存其中一整瓶成1个1ml冻存管，另外一瓶继续传代，反复冻存2-3只后才扩增做实验，以防突发情况引起断种。
干冰发货：常规细胞发货冻存管2只，复苏1只，另外一只备用，**个复苏不成功时严格按照厂家要求复苏第二个，均没有复苏成功的情况即时留存复苏照片通知销售。 |
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