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产品名称	NK92MI 恶性非霍奇金淋巴瘤患者的自然杀伤细胞
商品货号	BRCC-007-0216
中文名称	恶性非霍奇金淋巴瘤患者的自然杀伤细胞
组织来源	赛比曼 STR鉴定已通过
形态特征	形态：卵母细胞样,悬浮生长。用途：仅供科研使用。
特征特性	NK-92细胞是从一位患有急进性非霍奇金淋巴瘤的50岁白人男性外周血单核细胞衍生来的一株IL-2依赖型NK细胞株。NK-92MI细胞是转染得到的源自NK-92细胞的IL-2非依赖的NK细胞株。亲本细胞NK-92通过微粒体基因转化法用逆转录病毒MFG-hIL-2载体携带的人IL-2cDNA进行转化。可能由于载体整合到基因组DNA中，转化是稳定的。这株细胞对很多恶性细胞有细胞毒性；铬释放试验显示它能杀死K562细胞和Daudi细胞。NK-92细胞有以下特征：CD2、CD7、CD11a、CD28、CD45、CD
细胞污染
培养条件	MEMα+肌醇0.2mM+β-巯基乙醇0.1mM+叶酸0.02mM+马血清12.5%+FBS12.5%+P/S1%
传代方法	1）准备MEMα(推荐货号：BasMed-AW-003)+)+0.2mM Inositol（肌醇） +0.1mM β-mercaptoethanol （β巯基乙醇）β+0.02mM Folic Acid（叶酸）+100-200U/mL recombinant IL-2白介素+12.5% HS(HYCLONE马血清）+12.5% FBS+1% P/S 换液频率：每周2-3次 2）培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
细胞冻存步骤	待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例； 1．细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入2ml完全培养基终止消化，可使用血球计数板计数。 2．1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮，加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每1ml的数量分配到冻存管中，注意冻存管做好标识。博瑞生物按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。3．将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
复苏细胞步骤	贴壁细胞参考：一.消毒静置等细胞稳定后拍照100X和200X。弃去培养上清，用PBS润洗细胞1-2次并吸走。二. T25瓶加入0.25％EDTA胰蛋白酶1-2ml于培养瓶中震荡混匀，如果属于贴壁不牢固的细胞很容易脱落的就培养箱外面消化震荡待脱落90%以上终止消化，一般小于1分钟以内，甚至不加胰酶有部分贴壁非常不牢固的细胞也会自然震荡脱落。如果是贴壁牢固的细胞则置于37℃培养箱中消化提高效率，每40-50秒拿出培养箱震荡帮助细胞脱落，如脱落90%以上则对应3-6ml含有10%血清的完全培养基终止彻底，以防胰酶残留损伤细胞。如果贴壁非常牢固的细胞，脱落的比例比较低，也不超过2分钟后终止消化彻底，再加入1ml完全培养基让细胞缓冲后再过2分钟进行二次消化，反复分步消化以降低单次消化时长，减少刺激，保护细胞膜。或采用刮产刮细胞的方式处理也可以。总归原则是达到消化目的的同时减少细胞膜受到的损伤越小越好。三.消化完成后轻轻吹匀后吸出，在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶/6cm培养皿中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2和以上比例进行，具体以实际细胞密度决定。期间多的细胞一定保存多份细胞冻存管备种。悬浮细胞参考：大多数悬浮细胞对于环境比较敏感，建议一直维持高密度生长，一般情况下细胞密度维持在1×10 5到1×10 6个/mL（不同细胞对密度要求不同）。如需分瓶可以将细胞悬液收集到离心管中800-1000rpm，离心5min，弃去上清，补加1-2mL培养液后重悬混匀后将细胞悬液按1：2的比例（首次可以1:1分瓶）分到新T25瓶中，添加5-6ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2和以上比例进行。大多数血液类相关的悬浮细胞受运输影响比较大，会出现一批死细胞，如果因此密度降低了，可以离心后转移至T25瓶中竖着培养，培养基添加5ml 以提高总体密度，隔一天后观察密度可以的话再补液3ml完全培养基后T25瓶放倒，等沉淀稳定后观察细胞密度，持续添加培养基等密度上升足够传代为止。
细胞传代步骤	如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
冻存条件	常温发货：收到后T25瓶消毒再放置培养箱静置2-3小时后观察密度和状态拍照2-3张反馈给销售，密度达标就可以传代。前期传代比例1:2，等再次长满后传代时建议冻存其中一整瓶成1个1ml冻存管，另外一瓶继续传代，反复冻存2-3只后才扩增做实验，以防突发情况引起断种。干冰发货：常规细胞发货冻存管2只，复苏1只，另外一只备用，**个复苏不成功时严格按照厂家要求复苏第二个，均没有复苏成功的情况即时留存复苏照片通知销售。

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