| 产品名称 | hTERT-HPNE 人正常胰腺导管细胞 |
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| 商品货号 | BRCC-400-0124 |
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| 中文名称 | 人正常胰腺导管细胞 |
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| 组织来源 | 国家资源库 |
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| 形态特征 | |
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| 特征特性 | M Ouellette通过逆转录病毒表达载体(逆转录病毒表达载体pBABEpuro)转导人胰管产生的，该载体含有hTERT基因。受感染的细胞端粒酶呈阳性，但未衰老，在Ref的文献中传代150多次后仍在增殖。来源于52岁男性患者。将 hTERT-HPNE 细胞暴露于丁酸钠和 5-氮杂-2'-脱氧胞苷导致形成以 p-糖蛋白（多药耐药性 (MDR-1)）、碳酸酐酶 II 和细胞角蛋白表达为标志的胰腺导管细胞7、8 和 19。发现细胞具有在腺泡到导管化生过程中形成的中间细胞的特性，其中包括它们的未分化表型、巢蛋白 |
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| 细胞污染 | |
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| 培养条件 | 75%DMEM(无糖)+25%MediumM3+5%FBS+10ng-mlrhEGF+2.5mMD-葡萄糖+750ng-ml嘌呤霉素+1%P/S |
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| 传代方法 | 1）准备DMEM(无糖) （BasMed-AW-016） 70.5% ;Medium M3 (M300F-500) 23.5%;FBS 5 %;重组人表皮生长因子EGF 10ng/ml;嘌呤霉素 750 ng/ml;D-葡萄糖 2.5g/L;P/S 1% 2） 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。 |
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| 细胞冻存步骤 | 待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例； 1．细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入2ml完全培养基终止消化，可使用血球计数板计数。 2．1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮，加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每1ml的数量分配到冻存管中，注意冻存管做好标识。博瑞生物按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。3．将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 |
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| 复苏细胞步骤 | 将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。 |
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| 细胞传代步骤 | 如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。 |
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| 冻存条件 | 常温发货：收到后T25瓶消毒再放置培养箱静置2-3小时后观察密度和状态拍照2-3张反馈给销售，密度达标就可以传代。前期传代比例1:2，等再次长满后传代时建议冻存其中一整瓶成1个1ml冻存管，另外一瓶继续传代，反复冻存2-3只后才扩增做实验，以防突发情况引起断种。
干冰发货：常规细胞发货冻存管2只，复苏1只，另外一只备用，**个复苏不成功时严格按照厂家要求复苏第二个，均没有复苏成功的情况即时留存复苏照片通知销售。 |
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