北京博瑞康沐生物技术有限公司

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产品名称	NCI-H292 人肺癌细胞(淋巴结转移)-肺粘液表皮样癌
商品货号	BRCC-400-0186
中文名称	人肺腺癌细胞
组织来源	国家资源库
形态特征	形态：上皮细胞样，贴壁生长。用途：仅供科研使用。
特征特性	AF Gazdar从一名32岁黑人女性的肺支气管黏液上皮样癌的淋巴结转移灶中获得；细胞在化学成分确定的培养基(HITES) 中分离，然后适应在补充有血清的培养基中生长。保留了黏液上皮的特性，可从其超微结构的表现和多种鳞状上皮分化标记的表达而判断。支持HBV的生长，左旋多巴脱羧酶阴性。可以作为筛选模型，将人类亚基因组片段转染入细胞来研究HBV及其自身基因在病毒性肝炎和肝癌发生中的作用。角蛋白、波形蛋白、黏液洋红染色阳线，但神经丝三联蛋白阴性。在裸鼠中可致瘤，肿瘤组织学与原始活检标本相似，并保留粘液表皮样特
细胞污染
培养条件	1）准备RPMI-1640（推荐awcell-0002）培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%。 2）培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
传代方法
细胞冻存步骤	待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例； 1．细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入2ml完全培养基终止消化，可使用血球计数板计数。 2．1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮，加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每1ml的数量分配到冻存管中，注意冻存管做好标识。博瑞生物按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。3．将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
复苏细胞步骤	将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
细胞传代步骤	如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
冻存条件	常温发货：收到后T25瓶消毒再放置培养箱静置2-3小时后观察密度和状态拍照2-3张反馈给销售，密度达标就可以传代。前期传代比例1:2，等再次长满后传代时建议冻存其中一整瓶成1个1ml冻存管，另外一瓶继续传代，反复冻存2-3只后才扩增做实验，以防突发情况引起断种。干冰发货：常规细胞发货冻存管2只，复苏1只，另外一只备用，**个复苏不成功时严格按照厂家要求复苏第二个，均没有复苏成功的情况即时留存复苏照片通知销售。

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